關(guān)于酶標板性能檢驗的詳細說(shuō)明

　　

　　一、酶標板透光率均一性

　　隨機抽取5塊96孔板，用酶標儀設置雙波長(cháng)（主波長(cháng)450nm,參考波長(cháng)630nm）檢測OD值，根據OD值（OD值=OD450-OD630）計算出各孔的透光率T（吸光度A=-lgTT為透光率）。再計算出CV值（CV=標準偏差/平均值）。

　　

　　二、儀器：酶標儀、微量移液器（加樣槍?zhuān)?通道移液器（排槍?zhuān)ú灰欢ㄐ枰?、旋渦混勻器、微型離心機、生化培養箱。

　　

　　三、材料、試劑

　　蒸餾水

　　0.05MpH=9.6碳酸鹽（CBS）緩沖液

　　正常人IgG（sigma，10mg/支）

　　BCA微量蛋白質(zhì)濃度測定試劑盒

　　

　　四、操作步驟：

　　1、復溶正常人IgG（sigma，10mg/支）

　　新到的正常人IgG（sigma，10mg/支），離心，使干粉聚到瓶底，瓶?jì)燃尤?ml蒸餾水，充分溶解、混勻，得到10mg/ml的IgG溶液。

　　備注：為保存抗體活性，應置-20℃凍存。為避免反復凍融造成的活性下降，復溶后盡量分裝凍存。

　　2、配制正常人IgG濃度為50ug/ml的包被液，溶劑為0.05MpH=9.6碳酸鹽（CBS）緩沖液。

　　3、計算所需包被液的體積V，理論上V=需包被孔數×100ul/孔，但實(shí)際上應至少要多配300ul，原因：①后面檢測液體蛋白質(zhì)濃度時(shí)要檢測包被前包被液蛋白質(zhì)濃度；②包被時(shí)損耗。包被孔數：考慮節約，每塊板可以只包被幾個(gè)孔，如果有幾批不同工藝的待檢測酶標板，每批抽兩塊板檢測，每塊板包被幾排孔。

　　4、計算需要的10mg/ml的IgG的體積V1=(V×30ug/ml)÷10mg/ml。

　　5、計算需要的CBS的體積V2=V-V1

　　6、取V2體積的CBS，加入V1體積的10mg/ml的IgG，混勻，制得包被液。

　　備注：包被液盡量現配現用，可置2-8℃短期保存。

　　7、包被。用移液器每孔加入100ul包被液。加液完成后，用透明膠帶封閉板孔，置4℃冰箱包被過(guò)夜。

　　8、蛋白吸附能力檢測：BCA試劑盒。

　　9、配制標準曲線(xiàn)溶液

　　10、將5mg/mlBSA標準溶液稀釋到40ug/ml。

　　配制2.5ml40ug/mlBSA：20ul5mg/mlBSA+2480ulCBS,混勻。